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堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

產(chǎn)品型號:

所屬分類:病理學(xué)檢測實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品時間:2024-08-30

簡要描述:提供商: 上海研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱: 堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
規(guī)格: 樣本

詳細(xì)說明:

 

 

堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

 

 

堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡介:

堿性磷酸酶(AKP) 的顯示方法早由Gomeri (1939) 提出,現(xiàn)在這種方法稱為Gomeri法。堿性磷酸酶是指磷酸單酯酶I,它能在pH8. 6~10.0的適條件下分解磷酸單酯,對于與磷酸相接的醇基沒有特異性,Gomeri法是讓該酶在堿性條件下,分解甘油磷酸鈉,產(chǎn)生磷酸根。

堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理:

在一定條件下,使細(xì)胞中的酶作用于酶的底物,使其產(chǎn)物在原地進(jìn)行捕捉、沉淀轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物。細(xì)胞組織中的堿性磷酸酶在堿性(PH9.0- 9.6)環(huán)境下使作用液中的底物(a- 磷酸萘酚鈉)水解,產(chǎn)生出a蔡酚,然后再與偶氮鹽偶聯(lián),生成不溶性的耐曬染料(終產(chǎn)物的顏色因所用偶氮鹽的品種不同而有所不同)。

實(shí)驗(yàn)操作流程:

1、取材、固定、包埋、切片;

2.取已粘好烘干的切片兩塊,放入二甲苯(一)→二甲苯(二) (各3-4分鐘) 的染缸中進(jìn)行脫蠟,再經(jīng)100%乙醇()- +100%乙醇(二) - -95%乙醇- -90%乙醇- -70%乙醇- -30%乙醇- +z水。 每級各一分鐘,在移切片時,用鑷子夾住切片震蕩并提起,放下反復(fù)幾次,在移入下-染缸邊緣前稍停留。讓溶液滴凈后,再入下一染缸,以免把上一染缸溶液過多帶入下-染缸,而影響切片質(zhì)量;

3.將其中一塊切片以蠟筆作-標(biāo)記(用作對照組切片),放入沸水中煮沸5分鐘;

4.將兩塊切片均放入AKP作用液中孵育30-60分鐘,作用液要事先預(yù)熱到37"C,水浴中進(jìn)行:

5、取出切片在蒸餾水中洗滌;

6、放入硝酸鈷溶液2-3分鐘;

7.蒸餾水沖洗干凈,否則切片易被污染,影響定位;

8、切片浸入硫化銨中2-3分鐘;

9.蒸餾水沖洗干凈;

10.經(jīng)各級酒精脫水。即30%乙醇- -70%乙醇- -90%乙醇- -950%乙醇- -100%乙醇 (二)- -100%乙醇 (),各級分鐘在顯微鏡下觀察,細(xì)胞中有黑色沉淀存在的地方,就表明有酶的存在。煮沸的對照切片無黑色沉淀。

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA測序

動物實(shí)驗(yàn)

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細(xì)胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)



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