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真核表達載體構(gòu)建實驗服務(wù)/實驗流程

真核表達載體構(gòu)建實驗服務(wù)/實驗流程

產(chǎn)品型號:

所屬分類:分子生物學實驗

產(chǎn)品時間:2024-08-30

簡要描述:真核表達載體構(gòu)建實驗服務(wù)/實驗流程
[平臺項目開展范圍]慢病毒,腺病毒,RNAI類, 分子生物實驗,病理實驗,免疫學實驗,細胞實驗,動物實驗,蛋白組學實驗,芯片類實驗,并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計指導、基金申請指導、SCI. 核心期刊等服務(wù)。

詳細說明:

真核表達載體構(gòu)建實驗服務(wù)/實驗流程

 

 

 

.服務(wù)介紹

分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴 增特定DNA*&片段的方法。常含有目的基因,用體外重組方法將它們插入克隆載體,形成重組克隆載體,通過轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導的方式,引入適合的寄主體內(nèi)得到復制與擴增,然后再從篩選的寄主細胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體,可以得到插入DNA的許多拷貝,從而獲得目的基因的擴增。

 

二、實驗原理

外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組,這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統(tǒng)中,將分別經(jīng)酶切的載體分子與外源DNA分子進行連接。DNA連接酶有兩種: T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個帶有相同粘性末端的DNA分子連在-起的功能, 而且T4噬菌體DNA連接酶還有一種大腸桿菌連接酶沒有的特性,即能使兩個平末端的雙鏈DNA分子連接起來。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低,一般可通過提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來提高平末端的連接效率。T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應(yīng)分為3步:首先,T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶- AMP復合物;然后,酶一AMP復臺物再結(jié)合到具有5磷酸基和3羥基切口的DNA上,使DNA腺苷化;后產(chǎn)生一個新的磷酸二酯鍵, 把切口封起來。

DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法,為了防止載體本身的自連,可以通過(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。

連接反應(yīng)的溫度在37°C時有利于連接酶的活性但是在這個溫度下,粘性末端的氫鍵結(jié)合是不穩(wěn)定的。因此人們找到了一個折中溫度,即12-16°C, 連接12-16h(過夜), 這樣既可大限度地發(fā)揮連接酶的活性,又兼顧到短暫配對結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。

 

三、實驗流程

1.目的DNA的擴增和純化;

2.連接反應(yīng);

3.電泳檢測連接產(chǎn)物。

 

四、客戶提供

樣本DNA,基因序列,試劑盒。

 

五、公司提供

構(gòu)建好的載體,電泳膠圖,測序結(jié)果。

 

實驗代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務(wù)

流式細胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA測序

動物實驗

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗

 

免疫共沉淀

真核表達載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標定量(Label-free)實驗



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