一、
氯霉素檢測(cè)具體實(shí)行步驟:
樣品制備
a)將3克已均質(zhì)的樣品放入15mL離心管中,再加入6mL乙酸乙酯,震蕩5分鐘。
b)用離心機(jī)離心1700×g10分鐘,取2mL上層液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,于50℃下,利用氮?dú)鈱⒂袡C(jī)溶劑吹干。
c)在此玻璃管中加入正己烷1mL,先將殘余物*溶解后,再加入1mL樣品稀釋液,震蕩30秒鐘。
d)用離心機(jī)離心1700×g 10分鐘,利用吸管吸去包含中問(wèn)乳化層部分的上層液(正己烷),再吸取下層液(水層)備用。
稀釋倍數(shù):1
若待測(cè)物為白蝦可按以下流程將樣品做8倍濃縮以增加檢品敏感度
a)將6克已均質(zhì)的樣品放入15mL離心管中,再加入6mL乙酸乙酯,震蕩5分鐘。
b)用離心機(jī)離心1700×g 10分鐘,取4mL上層液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,于50℃下,利用氮?dú)鈱⒂袡C(jī)溶劑吹干。
c)在此玻璃管中加入正己烷2mL,先將殘余物*溶解后,再加入0.5mL樣品稀釋液,震蕩30秒鐘。
d)用離心機(jī)離心1700×g 10分鐘,利用吸管吸去包含中問(wèn)乳化層部分的上層液(正己烷),再吸取下層液(水層)備用。
稀釋倍數(shù):0.125
二、氯霉素檢測(cè)的操作步驟:
1、于適當(dāng)微孔中分別加入100mL標(biāo)準(zhǔn)溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。
2、在另外的微孔中加入100mL已完成前處理的樣品溶液。
3、再于每一微孔中另再加入50mL酶標(biāo)記物。
4、輕敲盤(pán)子四周,使其充分混合后于室溫下避光靜置溫育1小時(shí)。
5、將微孔中的反應(yīng)液甩掉,再將洗液加滿(mǎn)每一微孔后甩掉,重復(fù)洗3次。
6、較后一次甩掉后,在吸水紙上拍干。
7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后,輕敲盤(pán)子四周,使其充分混合。
8、于室溫下避光靜置溫育20分鐘。
9、于每一微孔中加入100mL反應(yīng)終止液。
10、用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)450nm下判讀。