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HiFiScript快速去基因組cDNA*鏈合成試劑盒
更新時間:2015-06-08 點擊量:2411

HiFiScript快速去基因組cDNA*鏈合成試劑盒說明書

 

 

 

HiFiScript Quick gDNA Removal

cDNA Kit

HiFiScript快速去基因組cDNA*鏈合成試劑盒

 

目錄號:YJ2582

保存條件:-20℃。

規(guī)格說明

 

     Cat. No.                    YJ2582-25       YJ2582-100

     Kit Size                         25              100

     gDNA Eraser                    12.5 μl          50 μl

     10×gDNA Eraser Buffer           30 μl           120 μl

     HiFiScript,200 U/μl             25 μl           100 μl

     5×RT Buffer                    120 μl           500 μl

     Primer Mix                      30 μl           120 μl

     RNase-Free Water                1 ml            2×1 ml

 

 

        本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

 

 

產(chǎn)品簡介

 

  本產(chǎn)品是用于去除基因組DNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄的試劑盒。該試劑盒在42℃,2 min即可

除去基因組DNA。同時由于反轉(zhuǎn)錄試劑中含有抑制gDNA  Eraser的組分,經(jīng)過   gDNA

Eraser處理后的樣品可以直接進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA。本試劑盒配有新型反轉(zhuǎn)

錄酶HiFiScript,新穎突變位點大幅提升酶的轉(zhuǎn)錄活性,  cDNA*鏈合成的效率和產(chǎn)

量更高,可利用pg級的總RNA或mRNA合成cDNA*鏈。如逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA用于下

游熒光定量檢測,可在42℃,15min完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。本試劑盒適用于*鏈 cDNA的

合成和后續(xù)的RT-PCR、RT-qPCR、以及全長cDNA文庫的構(gòu)建等。

 

產(chǎn)品特點

 

1.快速去除基因組:含有去除基因組DNA的gDNA  Eraser,只需 2 min即可除去基因

   組DNA。

2.快速逆轉(zhuǎn)錄:15分鐘即可獲得熒光定量PCR模板cDNA*鏈合成。

3.靈敏度高:可利用pg級總RNA或mRNA模板合成cDNA*鏈。

4.的逆轉(zhuǎn)錄效率:新穎突變位點大幅提升酶活性能,獲得更高產(chǎn)量的cDNA。

 

注意事項

 

1.在操作過程中應(yīng)避免RNase污染,防止RNA降解或?qū)嶒炛械慕徊嫖廴?,建議操作人

   員帶口罩和一次性手套并經(jīng)常更換手套,使用專門的儀器和耗材。

2.逆轉(zhuǎn)錄體系配制在冰上進(jìn)行操作,防止RNA發(fā)生降解。試劑盒的酶使用后盡快置于

   -20 oC保存,并盡量避免反復(fù)凍融。

3.反應(yīng)體系可倍比放大,10 μl反應(yīng)體系可zui大使用1μg總RNA。

4.Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成,也可根據(jù)實驗需要選用

   Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。

5.若起始RNA的量小于50 ng,建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提

   供,如需要可單獨向本公司訂購,貨號為YJ0596。

6.對于二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板,建議在操作步驟之前,將模板RNA在65℃孵育5分

   鐘立刻置于冰上,短暫離心后進(jìn)行下一步操作。

 

操作步驟

 

    將模板RNA在冰上解凍;試劑盒組分在室溫解凍后立刻置于冰上。使用前將每種溶

液渦旋振蕩混勻,并經(jīng)短暫離心后使用。

 

一、去除基因組DNA反應(yīng)

 

1.根據(jù)以下表格在冰上配制反應(yīng)體系,總體積為10 μl。為了保證反應(yīng)液配制的準(zhǔn)確性,先按反應(yīng)數(shù)+2的量配制預(yù)混體系,然后再分裝到每個反應(yīng)管中,zui后加入RNA樣品。

 

                    試劑                           10 μl反應(yīng)體系

 

                    10×gDNA Eraser Buffer          1 μl

                    gDNA Eraser                   0.5 μl

 

                    RNA Template1)               10 pg-1 μg

                    RNase-Free Water             up to 10 μl

 

   注意:1)如果總RNA量大于1 μg,請按比例擴(kuò)大反應(yīng)體系。若起始RNA的量小于50 ng,則建議   

   加入RNA酶抑制劑(RNasin),該產(chǎn)品貨號為YJ0596。

2.渦旋震蕩混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

3.42℃孵育2分鐘(室溫反應(yīng)時,可以延長到30分鐘)。

4.反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

 

二、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

 

1.根據(jù)以下表格在冰上配制反應(yīng)體系,反應(yīng)液配制請在冰上進(jìn)行。為了保證反應(yīng)液配置的

   準(zhǔn)確性,先按數(shù)+2的量配制成預(yù)混溶液,然后再分裝 10 μl到每個反應(yīng)管中,取配制的預(yù)混液10 μl加入至已完成去基因組的步驟1反應(yīng)管中。

 

                    試劑                           20 μl反應(yīng)體系

 

                    步驟1反應(yīng)液                         10 μl

                    HiFiScript,200 U/μl            1 μl

 

                    Primer Mix 1)                  1 μl

                    5×RT Buffer                    4 μl

                    RNase-Free Water               4 μl

 

   注意:1)  可根據(jù)實驗需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer,建議20 μl 反應(yīng)體Oligo-dT Primer 50pmol,或Gene Specific Primer 2 pmol。

 

  1. 混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。
  2. 3.cDNA合成反應(yīng)條件:

     1)若下游進(jìn)行熒光定量PCR檢測,42℃孵育15分鐘,85℃孵育5分鐘。

     2)若下游進(jìn)行普通PCR檢測,42℃孵育30-50分鐘,85℃孵育5分鐘。

注意:對于二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜或GC含量高的模板,可以提高逆轉(zhuǎn)錄溫度至50℃,增強(qiáng)逆轉(zhuǎn)錄效率。

 4.反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心后置于冰上,再進(jìn)行后續(xù)PCR或熒光定量PCR,如果需要長時

      間保存,請置于-20℃。

 

  注意:進(jìn)行Real-time PCR反應(yīng)時,逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加量應(yīng)不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10。

 

  

     相關(guān)產(chǎn)品信息

 

       目錄號  產(chǎn)品名稱                                        產(chǎn)品特點

YJ0580   TRIzon總RNA提取試劑                 適用范圍廣的RNA提取試劑

YJ0581  超純RNA提取試劑盒    兼具有適用范圍廣和純度高特點的RNA提取試劑

YJ0597  超純RNA提取試劑盒(含DnaseI)

                                靈敏度高,可識別pg級別的模板。與RNA親和力強(qiáng),

YJ0741   SuperRT cDNA*鏈合成試劑盒

                                     能夠通讀GC含量高,二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板。

YJ0744   HiFi-MMLV cDNA*鏈合成試劑盒  獲得cDNA產(chǎn)物

                  

YJ2381  SuperQuickRT  cDNA*鏈合成試劑盒(For Real-time PCR) 

                                   逆轉(zhuǎn)錄(針對于熒光定量PCR)僅需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA 

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YJ2391   (for Real-Time PCR)           需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA 

YJ0688   Es Taq DNA Polymerase 

                                            兼具高擴(kuò)增效率和高保真性的PCR產(chǎn)品

YJ0690   Es Taq MasterMix 

YJ0957   UltraSYBR Mixture                      熒光定量PCR—SYBR Green法

YJ0956   UltraSYBR Mixture(With ROX)            特異性強(qiáng)、Ct值低、定量更準(zhǔn)確

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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