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間充質干細胞成軟骨誘導分化試劑盒
更新時間:2024-11-06 點擊量:118

間充質干細胞成軟骨誘導分化試劑盒

,成軟骨誘導液

貨號:YJ-MSCYD-003

價格: 1980.0

規(guī)格: 100ml    200ml

產品描述

本產品為團隊精心優(yōu)化的間充質干細胞成軟骨誘導分化試劑盒,可增強間充質干細胞向成軟骨細胞分化的能力。

本產品僅用于科研用途,不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。

產品組成成分及保存

試劑名稱

體積(100mL規(guī)格/200mL規(guī)格)

保存條件

誘導分化添加劑

5mL / 10mL

-20℃,1 Year

誘導分化添加劑

1mL / 2mL

-20℃,1 Year

優(yōu)質胎牛血清

10mL / 20mL

-20℃,1 Year

細胞基礎培養(yǎng)基

84mL / 168mL

4℃1 Year

甲苯胺藍染色液

5mL / 10mL

RT(室溫),1 Year

注意:1.為保證產品的有效性,請避免反復凍融。

2. 誘導分化添加劑須現(xiàn)用現(xiàn)配,加入培養(yǎng)基后,須在12小時內用完,否則可能影響實驗效果。

3. 配制好的誘導分化預混液(不含誘導分化添加劑)保存于2-8℃,有效期為2周。

產品使用說明(2D/3D培養(yǎng))

1. 成軟骨誘導分化培養(yǎng)基的配制

室溫條件下融化添加劑及血清。(注意:若添加劑或血清中有沉淀物,屬正?,F(xiàn)象,無須過濾,避免成分丟失。)

配制誘導分化預混液:以下簡稱預混液。根據實驗用量,于無菌操作臺中配制。建議每次配制50mL,先加細胞基礎培養(yǎng)基和胎牛血清,再加誘導分化添加劑。(配制比例見表一)

試劑成分

配制比例

50mL配制體系

誘導分化添加劑

5%

2.5mL

優(yōu)質胎牛血清

10%

5mL

細胞基礎培養(yǎng)基

85%

42.5mL

配制誘導分化完全培養(yǎng)基:根據實驗用量,按照1%的比例向預混液中添加誘導分化添加劑,如每1mL預混液添加10uL誘導分化添加劑。(注意:誘導分化添加劑須現(xiàn)用現(xiàn)加,配制完成的誘導分化完全培養(yǎng)基12h內使用完,否則將失效。)

2. 2D成軟骨誘導分化實驗步驟

建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態(tài)良好的間充質干細胞,將其消化下來,離心收集,使用含10%FBS的培養(yǎng)基調整細胞密度,均勻鋪于培養(yǎng)瓶/板中。將接種好的細胞置于37℃5%CO2,飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(細胞接種詳情參考表二)

培養(yǎng)器皿

底面積

細胞量

培養(yǎng)液體積

24孔培養(yǎng)板

2cm/

2×105cell/

1mL/

12孔培養(yǎng)板

4.5cm/

4.5×105cell/

2mL/

6孔培養(yǎng)板

9.6cm/

9.6×105cell/

2mL/

T25培養(yǎng)瓶

25cm

25×105cell

5mL

6cm培養(yǎng)皿

21cm

21×105cell

5mL

10cm培養(yǎng)皿

55cm

55×105cell

10mL

                                                                            表二

待細胞匯合度達80%~100%時,即可進行誘導分化。

小心吸棄細胞培養(yǎng)上清,沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導分化完全培養(yǎng)基,置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(注意:完全培養(yǎng)基加入細胞前需提前置于37℃預熱。

2day~3day換用新鮮的誘導分化完全培養(yǎng)基。換液時,若細胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色,是由于細胞量較大,培養(yǎng)基消耗較快導致的,請及時調整為每日換液。(注意:完全培養(yǎng)基加入前需提前置于37℃預熱。

細胞誘導3周后,即可進行甲苯胺藍染色鑒定。

3. 2D成軟骨細胞甲苯胺藍染色分析

細胞誘導分化結束后,小心吸棄細胞培養(yǎng)上清,1×PBS潤洗1~2次,室溫固定30 min。(細胞固定液為4%中性甲醛溶液等,體積參考表二

吸棄細胞固定液,1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入甲苯胺藍染色液,染液體積請參考表二,室溫染色30min。(注意:染色液底部可能會有沉淀,吸取時盡量不要觸及底部。若染色后有沉淀,1×PBS洗去即可。

吸出染色液,1×PBS潤洗,去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果,背景呈淡藍色,成軟骨細胞呈紫紅色。(注意:染色液可重復使用,建議收集。

 

圖片1.png

4. 3D成軟骨誘導分化實驗步驟

建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態(tài)良好的間充質干細胞,將其消化下來,計數(shù)。調整細胞濃度,按照每管3~4×105cell將細胞轉移至15mL離心管中,20℃,250×g離心4min

棄上清,每管加入0.5mL預混液,重懸細胞沉淀。20℃,150×g離心5min。

棄上清,每管加入0.5mL成軟骨誘導分化完全培養(yǎng)基重懸細胞沉淀,20℃,150×g離心5min

將離心管樹立放置于37℃,5%CO2,飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),擰松離心管蓋以便于氣體交換。(注意:此步驟無需重懸細胞,且24h內不可晃動離心管。

24h~48h后,細胞出現(xiàn)聚團現(xiàn)象,輕彈離心管底部使軟骨球脫離管底懸浮于培養(yǎng)液中。

2~3day換用新鮮的誘導分化完全培養(yǎng)基,持續(xù)誘導三周后,即可將培養(yǎng)液更換為固定液(4%中性甲醛),將軟骨球固定,后續(xù)進行切片染色鑒定實驗。

圖片2.png

質量控制

無菌檢測(細菌、真菌和支原體檢測)

pH測試

滲透壓檢測

內毒素

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注意事項

僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質,請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內部;這部分有害物質的濃度和危害性都較低,如有接觸,立即用自來水沖洗即可。

 

2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫(yī)學實驗技術及論文潤色服務,協(xié)助客戶各類實驗服務及論文潤色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

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