法氏囊抗體檢測采用法氏囊抗原作固相抗原檢測雞血清中的特異性法氏囊抗體。本試劑靈敏度高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好,操作方便快速,可分多次使用。
法氏囊抗體檢測的操作程序
1. 樣本稀釋:用樣本稀釋液(5號(hào)液)將待檢血清按1:100稀釋,如5ul血清+500ul樣本稀釋液,充分混勻。陰、陽對(duì)照不用稀釋。
2. 加樣反應(yīng):樣本檢測孔每孔分別加已稀釋樣本血清100ul。同時(shí)設(shè)陰性、陽性及空白對(duì)照各一孔,取陰性、陽性對(duì)照各100ul分別加入反應(yīng)孔內(nèi),空白對(duì)照孔僅加入100ul樣本稀釋液(5號(hào)液)。37℃避光反應(yīng)30分鐘后甩去孔內(nèi)液體,每孔加洗滌液(2號(hào)液)一滴,立即用蒸餾水注滿,靜置30秒后甩去,再直接用蒸餾水洗滌四次,甩去,拍干。
3. 加酶反應(yīng):除空白對(duì)照孔外其余每孔加酶結(jié)合物(1號(hào)液)二滴,37℃避光反應(yīng)30分鐘后甩去孔內(nèi)液體,如上洗滌,拍干。
4. 顯色反應(yīng):加底物(3號(hào)液)和顯色劑(4號(hào)液)各一滴,混勻,37℃下避光顯色10分鐘。加終止液(6號(hào)液)一滴,混勻,終止反應(yīng)(加終止液后藍(lán)色會(huì)變?yōu)辄S色)。
法氏囊抗體檢測的結(jié)果判斷
1.肉眼觀察:陰性對(duì)照接近無色,陽性對(duì)照呈明顯黃色,表示試驗(yàn)有效。待檢孔接近無色表示該標(biāo)本為陰性,待檢孔呈明顯黃色表示該標(biāo)本為陽性。
2.儀器判斷:以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm(620nm作參比波長)讀取O.D值,待檢孔O.D值大于陰性對(duì)照2.1倍者為陽性。當(dāng)陰性對(duì)照O.D值低于0.05時(shí)按0.05計(jì)算。
法氏囊抗體檢測的注意事項(xiàng)
1.試劑盒在2-8℃下保存,每次取出時(shí)先平衡至室溫后使用。滴瓶每次用后一定要將蓋擰緊,各瓶蓋之間切不可混用。各試劑盒之間不可混用。
2.洗滌時(shí)將蒸餾水加滿孔內(nèi),每次停放三十秒鐘后甩去孔內(nèi)液體。禁用自來水等其它水源。
3.為提高試驗(yàn)的可比性建議使用儀器判讀結(jié)果,并對(duì)陰性對(duì)照測復(fù)孔以減少誤差。