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炭疽桿菌(BA)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR 法)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】 將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反
通用名稱(chēng):炭疽桿菌(BA)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR 法)應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
Name :Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method) 4 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
【包裝規(guī)格】48T/盒
炭疽是由炭疽桿菌(Bacillus Anthracis, BA)感染引起的一種人獸共患病。BA 在環(huán)境中形成芽孢,可長(zhǎng)期、穩(wěn)定地存在于自然界中。由于 BA 的穩(wěn)定性及其致病性,易引發(fā)突發(fā)公共衛(wèi)生事件。目前的 BA 檢測(cè)方法主要基于病原體的培養(yǎng)、染色鏡檢、血清學(xué)檢測(cè)等,但這些方法均不適合早期的快速偵檢?;诤怂釞z測(cè)的熒光-PCR技術(shù),因其靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、特異性好,可快速檢測(cè)炭疽病原,及時(shí)控制炭疽疫
4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;
熒光通道選擇: 檢測(cè)通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)
NONE,ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
情 。
[1] 本試劑盒適用于檢測(cè)皮膚水泡液、咽拭子、可疑食物等樣本中的炭疽桿菌,用于
炭疽桿菌感染的輔助診斷。
5 結(jié)果分析判定
6.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
本試劑對(duì)炭疽桿菌特異性基因設(shè)計(jì)引物和熒光探針[2-3],用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)炭疽 設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)
桿菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。
整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)
節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。
名 稱(chēng) 規(guī) 格
核酸提取液酶液
BA 反應(yīng)液
BA 陽(yáng)性質(zhì)控品
陰性質(zhì)控品
注:
1.5mL×2 管
50μL×1 管
1.0mL×1 管
50μL×1 管
250μL×1 管
7結(jié)果判斷
陽(yáng)性:檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0,丏曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。
可疑:檢測(cè)通道 Ct 值>35.0,丏出現(xiàn)明顯擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn),重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和明顯擴(kuò)增曲線者為陽(yáng)性,否則為陰性。
陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值丏無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線。
1) 不同批號(hào)試劑不能混用。 Ø 樣本檢測(cè)結(jié)果不樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);
2) 試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測(cè)次數(shù)。
-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融數(shù)不超過(guò) 5 次,有效期 12 個(gè)月。
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列
Ø 樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;
Ø 陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果;
Ø 病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
Ø 不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
Ø 試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定 量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;
熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。 Ø 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。
皮膚炭疽,取水泡液 1mL;肺炭疽,采集咽拭子標(biāo)本,放入標(biāo)本采集管中;腸炭疽,取糞便 1g
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò) 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
9. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:無(wú)明顯擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示;
陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,丏 Ct 值≤32;
以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
Ø 所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;
Ø 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*混勻并短暫離心;
Ø 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
1. . 樣品處理(樣本處理區(qū)) Ø 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
固體樣本:手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μ
L 于 1.5mL 滅菌離心管中;液體樣本:直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
1 111 提取
1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒溫處理 10min,13,000
rpm 離心 5min,取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;
2) DNA 的提取也可以采用深圳綠食源生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑盒
(離心柱提取法),請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
Ø 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)與用工作服;
Ø 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
Ø 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;
Ø 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通 則》進(jìn)行處理。
試劑 BA 反應(yīng)液 酶液
用量(樣本數(shù)為 N)20μL
1μL
將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,21uL/管。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
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