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IM9 人外周血B淋巴細(xì)胞
更新時(shí)間:2020-05-14 點(diǎn)擊量:2006

IM9 人外周血B淋巴細(xì)胞

 

Product Format: a 15 ml centrifuge tube

Culture Properties懸浮

Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

 

Components  

Item

Specifications

a 15 ml centrifuge tube

2X106

Manual

1 copy

 

Operation steps for cell culture

  • 輕輕吹勻細(xì)胞,收集懸液1000rpm(150g左右)離心3min,棄上清;
  • 用新的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,均勻分為幾份,接種到新的培養(yǎng)瓶中,并補(bǔ)加足量的*培養(yǎng)基;

(懸浮細(xì)胞比較依賴細(xì)胞密度,細(xì)胞傳代前及傳代后密度不宜過(guò)低,過(guò)低可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢或者死亡。細(xì)胞傳代前培養(yǎng)基不能*變黃,不然細(xì)胞狀態(tài)變差會(huì)導(dǎo)致傳代失敗。傳代過(guò)程吹打細(xì)胞應(yīng)盡量輕柔,不應(yīng)吹出過(guò)多氣泡。)

  • 將細(xì)胞放回37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

傳代比例: 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度不一,具體傳代比例視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定,大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代,生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。

Cell cryopreservation

  • 凍存液:92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇)
  • 降溫步驟:4度10min,-20度2h,-80過(guò)夜后液氮保存。

Tips:

  • 細(xì)胞經(jīng)過(guò)運(yùn)輸后,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰zhuang死亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900-1000rpm(約150g)離心3min,棄上清。加5ml PBS重懸細(xì)胞,再900-1000rpm(約150g)離心3min,用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時(shí)碎片比較少,傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗次。
  • 細(xì)胞生長(zhǎng)不均時(shí),可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
  • 細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢時(shí),可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)(高不超過(guò)20%),也可以根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

不同細(xì)胞貼壁性差異比較大,所以消化時(shí)間差別較大,20s-10min均有可能,具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落,并可以輕輕吹下為準(zhǔn),嚴(yán)禁消化到細(xì)胞*漂浮。

三聚氰胺檢測(cè)卡

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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