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關于豬藍耳病檢測你真的了解嗎?
更新時間:2019-10-24 點擊量:3145
       豬藍耳病檢測的主要目的是測定豬血清中豬藍耳病毒抗體,可用于評估感染豬的血清學診斷以及豬藍耳病毒疫苗免疫狀況分析。
  一、豬藍耳病檢測的檢驗原理:
  本試劑盒應用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)原理,由包被有高純度的豬藍耳病毒抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結(jié)合,再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶標抗豬IgG抗體”復合物,加入顯色劑,通過酶催化反應顯色。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比,當樣本反應顯色后,經(jīng)酶標儀檢測所得結(jié)果超過設定的臨界值時結(jié)果判為陽性,即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。
  二、豬藍耳病檢測的樣本要求:
  1.本試劑檢測的樣本為豬血清,樣本應無菌采集,2℃~8℃貯存應不超過一周,長期應在-20℃以下保存。
  2.避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本。
  三、豬藍耳病檢測的實驗準備:
  1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前,先取出置室溫30min,可以獲得較佳結(jié)果。.
  2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋,稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果。
  3.配制洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍(例:將50ml洗滌液加入950ml去離子水中)。若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶,屬正常現(xiàn)象,放置37℃至溶解后即可。
  四、豬藍耳病檢測的檢驗方法:
  1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條,檢測時,設陰、陽性對照各2孔,分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應孔中(可不設空白對照)。其余為樣本孔,每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本(可做單孔也可雙孔檢驗)。
  2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。
  3.洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿反應板孔,靜置10s左右,直接甩出,洗滌3次,洗滌后拍干板內(nèi)液體。
  4.加酶:每孔加酶標記物100μl。
  5.溫育:加好酶標記物后蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。
  6.洗板:同步驟3。
  7.顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,37℃避光反應10分鐘。
  8.終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻,終止后即讀數(shù)。
  9.讀數(shù):以450nm/630nm雙波長檢測,讀取各孔吸光度值(OD值)。
  五、豬藍耳病檢測的結(jié)果判定:
  在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6,陰性對照孔的平均OD值必須<0.15;樣品中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定,S/P值計算時按以下方式處理:
  S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/(PCx(—)-NCx(—)),其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD450/630值,PCx(—)表示陽性對照孔平均OD450/630值;
  當樣本的S/P≥0.2時判為陽性;樣品S/P值<0.2時判為陰性;
  若進行大量樣本檢測時,可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進行分析數(shù)據(jù)結(jié)果。

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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